用XM-15S大面积紫外线灯进行紫外线诱变育种,首先应准备孢子悬浮液。将新鲜食用菌无菌孢子移入5毫升无菌生理食盐水(经灭菌处理 的0.9%溶液),或磷酸缓冲溶液(由15克磷酸氢二钠和2克磷酸二氢钾共溶于1000亳升经灭菌而得的蒸馏水)中,摇匀后即成孢子悬浮液,萁浓度以每毫升含孢子100万至1亿 个为宜。
诱变时,在暗室内开启XM-15S大面积紫外线灯,调整紫外线灯台式支架的隔板高度。开始先开灯20分钟,波长稳定后取5亳升孢子悬浮液 倒入直径6厘米的无菌培养皿中,揭开皿盖,摇动培养皿, 使照射均匀,照射时间0.5—1.0分钟,照射后的抱子悬浮液每毫升含活孢子数在10—1000万个之间。要得到单菌落,得 先用无菌水樣释至每亳升10—100个,再取稀释液0.2毫升, 涂布于装有琼脂的培养皿上,在25℃温度下培育5—10天, 待菌落出现后,选纯正、健壮的单菌落移入斜面试管培养, 并做拮抗试验。
拮抗试验是取处理和未处理的菌丝各一块,接在同一斜面上,相距1 一2厘米,如处理后的孢子已发生变异,其菌丝与未处理的菌丝在相接处就会发生拮抗,形成一条明显的拮抗线;若未发生变异,则两方面的菌丝相连接成一体。
2023-11
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