核酸的分子生物学检测方法，如聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），能够用于精准地分析样本中微生物的种类和丰度，但是难以区分微生物的存活状态。传统的用于检测样本中活细胞的方法都需要对样本进行培养，但是此类检测方法存在一定的局限性，无法用于检测一些难培养或是不可培养的活细胞。

叠氮溴化丙锭（Propidium monoazide，PMA）是一种能与DNA结合的光反应染料，不具有细胞膜渗透性，无法穿透活细胞完整的细胞膜，只能选择性地穿透死细胞受损的细胞膜。进入细胞后，PMA会与DNA双螺旋发生共价交联，进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增，如图所示。

基于PMA的这一特性，通过对PMA处理过的样本进行PCR扩增和测序分析，即可得知样本中微生物的存活状态。

qPCR 法选择性的检测活细菌和死细菌，可广泛用于食品安全检测PMA高效选择和灵敏的检测死细菌中存在的活菌数在许多实际应用，包括安全检查，食品，饮用水的质量控制，医疗诊断等方面至关重要。传统使用细菌培养的检测方法，既费时又不灵敏。建立在实时荧光定量qPCR上的检测，是一个快速而高度敏感的替代方法。然而普通qPCR方法的分析结果并不能区分活死细胞。

定量 PCR 基本操作步骤

qPCR 法选择性的检测活细菌和死细菌，可广泛用于食品安全检测
添加 PMA 染料到样品中，并在黑暗中孵育

• 暴露在冷光下，使 PMA 染料交联到 DNA 上

• 裂解完整的细胞，提取 DNA

• 常规实时荧光定量 PCR PMA 高效选择和灵敏的检测死细菌中存在的活菌数在许多实际应用，包括安全检查，食品，饮用水的质量控制，医疗诊断等方面至关重要。

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